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[名师课件]DNA的粗提取与鉴定

来源:fjedu.com整理 2006-11-13

  目的要求

  1.了解实验原理。

  2.学会DNA的粗提取和鉴定的方法,观察提取出来的DNA物质。

  3.通过本实验培养实验操作能力和观察能力。

  实验原理

  1. DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的。 当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。

  2.DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。

  3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

  注意事项

  1.步骤3析出含DNA的黏稠物中,蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入,不能一次快速倒入。

  2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌,但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。

  实验用具

  鸡血细胞液(5~10 mL);体积分数为95%的冷酒精,蒸馏水,质量浓度为0.1 g/mL的柠檬酸钠溶液,物质的量浓度分别为2 mol/L和0.015 mol/L的NaCl溶液,二苯胺试剂;烧杯(100 mL,1个, 50 mL, 500 mL,各2个),漏斗,试管(20 mL,2个),玻璃棒,滴管,量筒(100 mL,1个),纱布,镊子,滤纸,铁架台,铁环,三角架,酒精灯,石棉网,载玻片,试管夹。

  课前准备

  制备鸡血细胞液,方法是:将质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液100mL,置于500 mL烧怀中,注入新鲜的鸡血(约180 mL),用玻璃棒搅拌,使其充分混合,以免凝血。静置于冰箱内一天,使血细胞自行沉淀。(也可以用离心机离心2 min(转速1000转/分)。用吸管吸去上清液



  实验十一 DNA的粗提取与鉴定

  实验原理:

  1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。

  2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。

  3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。

  方法步骤:

  1.提取细胞核物质:顺时针方向搅拌,稍快,稍重。 5 min

  2.溶解DNA:

  3.析出含DNA的黏稠物:蒸馏水300mL,逆时针方向搅拌,缓慢

  4.过滤:取黏稠物

  5.再溶解:顺时针方向搅拌,较慢。3 min

  6.过滤:取滤液。

  7.提取出含杂质较少的DNA,逆时针方向搅拌,稍慢。5 min

  8.DNA的鉴定:沸水浴5min



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